荧光定量PCR仪在阪崎肠杆菌病原检测中的应用

阪崎肠杆菌的致病性及病原监测技术
------------荧光定量PCR在阪崎肠杆菌病原检测中的应用

食品卫生安全是保障人类和公共卫生的重要课题。随着在乳制品中出现三聚氢氨造成社会关注的食品安全事件以来，加强对食品安全的监控已成为政府和社会关注的重大问题。对于食品特别是乳制品中的致病微生物的检测技术的应用具有现实的重要意义。阪崎肠杆菌是造成食品污染的重要微生物之一。坂崎肠杆菌（E. sakazakii）是乳制品中危害性较大的致病菌。

阪崎肠杆菌是奶粉(乳)制品中新发现的一种致病菌。由其引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球相继出现。多份研究报告表明婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道,在某些情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率可达40％～80%。阪崎肠杆菌已引起世界多国相关部门的重视。据报道,国外乳业巨头曾因此被召回.在美国FDA2002年在本土某一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后，2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉，阪崎肠杆菌从此成为世界瞩目的焦点。

阪崎肠杆菌检测技术及PCR设备的使用：荧光定量PCR仪： 

实时荧光定量PCR检测系统也叫实时荧光定量核酸扩增检测系统（英文全名是Real-time Quantitative PCR Detection System），简称实时荧光qPCR，qPCR的核心是实时荧光定量PCR仪及与其配套的检测分析软件系统。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction简称PCR）原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获1993年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势，因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流，至今仍处于学术和应用前沿。

传统PCR技术方法要点：

基因扩增热循环仪（DNA Thermal Cycler）+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂构成

传统基因扩增技术只能对最终产物分析，并要通过辅助设备最终完成-----检测时间长，无法实现实时分析。

Real-time qPCR-DNA/RNA实时荧光定量检测优势：

无需其他辅助设备进行实验，可以进行实时分析、绝对定量、相对定量分析，检测结果准确性提高、操作时间缩短，可用于原料及生产的中间产品、最终产品的检测，并可以进行定性、定量分析。

qPCR检测灵敏度高，检测线性范围宽，检测精度和重复性好等突出优势，因此被公认为目前世界用于临床及科研的最先进核酸分子诊断技术，被美国FDA承认并推崇。检测项目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原体如：乙肝病毒HBV DNA，丙肝病毒HCV RNA，艾滋病病毒HIV RNA，沙眼衣原体CT，淋病双球菌NG，巨细胞病毒CMV，结核分支杆菌Mtb、禽流感、阪崎肠杆菌、口蹄疫、新城疫、猪瘟、大肠埃希菌O157∶H7、沙门菌、炭疽芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等。

PCR技术的应用范围广，几乎所有的生命科学领域都要涉及：食品检测、临床检验、疾病控制、检验检疫、科研实验室、食品安全、化妆品检测、环境卫生等。

值得一提的是鉴于当前流行病的频发及有害微生物检测的必要性，国内外已将实时荧光定量PCR检测技术强制应用于相关行业并相继制定了国际、国家、及行业标准作为法律依据。例如：

SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 荧光PCR方法

GB/T 19438.1-2004 禽流感病毒通用荧光RT-PCR 检测方法

GB/T 19438.2-2004 H5 亚型禽流感病毒荧光RT-PCR 检测方法

       ISO22174-2005 食物病原体PCR检测方法

以下着重描述使用FUNGLYN荧光定量PCR仪对阪崎肠杆菌检测方法：

SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 荧光PCR方法

1、试剂盒中含有坂崎肠杆菌特异的引物，当样品中含有坂崎肠杆菌时，前增菌后提取的坂崎肠杆菌DNA通过PCR成指数扩增，在反应过程中坂崎肠杆菌特异的荧光探针跟靶核酸杂交, 同时被Taq酶水解, 把探针上的荧光基团和淬灭基团分开, 从而通过荧光增量来实时判断坂崎肠杆菌的存在

2、专用的阪崎肠杆菌检测试剂盒及开放性的耗材将给您的检测工作带来方便。优质的服务及专业技术支持将给您充分的使用保障。

3、同时可应用荧光定量技术，配置相应的检测试剂后，进行其他有害微生物的病原检测及卫生质量评价。